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        樣本密度分離液

        簡要描述:

        樣本密度分離液是適用于從人外周血液中分離淋巴細胞。根據細胞密度的差異,采用密度梯度沉降法,借助細胞分離液和離心技術,就可以進行淋巴細胞分離純化。

        更新時間:2023-07-31

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        樣本密度分離液培養操作步驟:

        1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

        2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

        3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

        4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

        5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

        樣本密度分離液實驗報告:

        一、分離與培養:

        1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;

        2、往組織塊中加入4 mL酶消化液,混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

        3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

        4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

        5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;



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